Полупрепаративный хроматограф “Протеохром”

  1. Устройство и работа

  2. Основные режимы работы хроматографа

Хроматограф – сложное многофункциональное устройство, работающее в различных режимах, различающихся по типу элюции, по типу управления, по режиму работы детектора:

градиентная элюция – элюция с изменяемой по определенному закону концентрацией элюента Б в элюенте А при постоянной объемной скорости;

изократическая элюция элюция с постоянной концентрацией элюента;

ручные операции – режим подготовки прибора. Анализ пробы в ручном режиме невозможен;

режим тестирования узлов прибора и гидравлической системы в целом;

многоволновой режим детекции – детекция производится на нескольких длинах волн, переключаемых по циклической программе;

одноволновой режим детекции – детекция производится на одной заданной длине волны;

Для Градиентной элюции характерны несколько моментов. При изменении элюирующей силы (концентрации элюента Б) в процессе хроматографии по определенному закону необходимо приведение условий на колонке и в жидкостной системе к некоторым начальным (равновесным) условиям, характерным для момента инжекции пробы. Т.е. необходим этап регенерации колонки, который предшествует нанесению пробы на колонку и элюции. Часто необходима промывкА колонки максимально допустимой концентрацией элюента Б в конце этапа элюции с целью вымыть из колонки все вещества, содержащиеся в пробе.

Для изократической элюции характерно постоянство концентрации элюента в процессе анализа (разделения). Изократическая элюция может рассматриваться как частный случай градиентной. Изократическая элюция может быть “абсолютной”, когда в насосах А и Б находится один и тот же элюент, формально насосы могут при этом отрабатывать градиент любой формы. Возможно формирование постоянной произвольной концентрации из двух растворителей А и Б.

Последовательность операций при анализе

Хроматограф автоматизирован и управляется по программе с компьютера. Все устанавливаемые (задаваемые) параметры анализа записываются в файл метода анализа. Результаты анализа автоматически записываются в файл результата, отчет выводятся на монитор и принтер по указанию оператора. Последовательность операций, автоматически выполняемых в процессе анализа, следующая.

После нажатия кнопки запуска анализа включается насос, концентрация растворителей соответствует начальной концентрации начала хроматограммы и поддерживается до момента загрузки образца. По окончании загрузки образца начинается хроматограмма и градиент начинает изменяться в соответствии с заданной программой. Окончание загрузки для ручного инжектора — перевод в положение «Анализ». Автоматический — окончание по программе или нажатием кнопки на мнемосхеме. С момента начала хроматограммы начинается отсчет заданных параметров по сбору фракций. По окончании выполнения программы по заданию градиента насос продолжает работать (не останавливается), а процентное содержание растворителя Б поддерживается в соответствии с последним значением в таблице градиента.

Набор пробы. Как говорилось выше, в хроматографе реализована инжекция пробы без остановки потока. Для набора пробы используются ручной и автоматический инжекторы. В автоматическом задаётся загружаемый объём, а в ручном применена загрузка с помощью петли фиксированного объёма.

Элюция производится в соответствии с программой. Формирование градиента производится по заданной программе одним насосом и одним электромагнитным клапаном. Форма градиента – произвольная, кусочно-линейная.

Детектирование – начинается с момента нажатия кнопки запуска анализа, запись данных начинается ПОСЛЕ нанесения (инжекции) пробы на колонку.